Лабораторные рекомендации по выявлению инфекции, вызванной вирусом оспы обезьян
Генеральный директор Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) объявил эскалацию глобальной вспышки оспы обезьян чрезвычайной ситуацией в области общественного здравоохранения, имеющей международное значение (PHEIC) 23 июля 2022 года. По данным ВОЗ, зарегистрировано более 35 000 случаев заболевания в 92 странах/территориях и 12 смертей по состоянию на 17 августа. Большинство зарегистрированных случаев (с историей поездок) были зарегистрированы в районах Европы и Северной Америки.
Оспа обезьян — это редкое заболевание, вызываемое вирусом оспы обезьян (MPXV) — оболочечным двухцепочечным ДНК-вирусом, принадлежащим к тому же семейству вирусов, которые вызывают оспу. Этот вирус может передаваться при контакте с биологическими жидкостями, повреждениями кожи или внутренних слизистых оболочек с такими симптомами, как лихорадка, головная боль и мышечные боли. Инкубационный период оспы обезьян обычно составляет от 6 до 13 дней, но может варьироваться от 5 до 21 дня (около трех недель).
По данным ВОЗ, лучшие диагностические образцы берутся непосредственно из сыпи — кожи, жидкости или корочек или биопсии, если они жизнеспособны. Другие методы, такие как обнаружение антигенов и антител, могут оказаться бесполезными, поскольку они не различают ортопоксвирусы.
При работе с образцами от подозреваемых, вероятных или подтвержденных случаев оспы обезьян в лаборатории рекомендуется подход, основанный на оценке риска. Таким образом, процедуры обнаружения MPXV, который относится к возбудителям группы риска 3, должны выполняться в лаборатории уровня биобезопасности 2 с использованием приведенного ниже списка оборудования.
Руководство по оборудованию для обнаружения вируса оспы обезьян
Хранение образцов и реагентов
Образцы MPXV рекомендуется хранить в холодильнике при температуре от 2°C до 8°C или замораживать (-20°C или ниже) в течение часа после сбора. Если время транспортировки превышает семь дней, образцы следует хранить при температуре -20°C или ниже. Между тем, для длительного хранения образцов рекомендуется температура -70°C (>60 дней со дня сбора).
Лабораторные холодильники, лабораторные морозильники и сверхнизкотемпературные морозильники Biobase оснащены хорошо спроектированными системами охлаждения и высококачественными материалами, подходящими для хранения чувствительных к температуре биологических образцов, требующих критических условий хранения.
Обращение с образцами и подготовка
MPXV может передаваться на этапе обработки образцов из-за загрязненного материала или неправильных методов. В связи с этим необходимо соблюдать повышенные меры биобезопасности. Перед инактивацией образцов образцы от пациентов с подозрением на MPXV должны быть подготовлены в функциональном боксе биобезопасности класса II; однако это не требуется для должным образом инактивированных образцов.
Помимо защиты, обеспечиваемой боксами биологической безопасности, боксы биологической безопасности Biobase класса II соответствуют требованиям NSF 49 и EN 12469, имеют удобные функции и покрыты противомикробным порошком на всех своих внешних и внутренних окрашенных поверхностях для повышения безопасности. Центрифуги необходимы для разделения жидких и твердых компонентов образца. Если это необходимо для процедуры, рекомендуется использовать защитные чашки или герметичные роторы.
Обнаружение и анализ
Тестирование амплификации нуклеиновых кислот (МАНК) проводится для подтверждения инфекции MPXV. Для обнаружения уникальных последовательностей вирусной ДНК используется либо ПЦР в реальном времени, либо обычная полимеразная цепная реакция (ПЦР). Обнаружение вируса состоит из двух шагов. Первая ПЦР выявляет ортопоксвирусы, но не идентифицирует вид, в то время как вторая ПЦР (или секвенирование) специфически обнаруживает MPXV.
Термоциклер ПЦР в реальном времени обеспечивает эффективную амплификацию нуклеиновых кислот для анализа вирусов. Компания Biobase предлагает новые термоциклеры Swift™ для ПЦР со встроенным компьютером для автономной работы от ввода программы ПЦР, мониторинга и анализа.